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        用于微生物分析的培養基制備的SOP

        1.0目標

        制定媒體準備程序。

        2.0范圍

        本標準操作程序適用于微生物學部分的培養基制備。

        3.0責任

        微生物學家

        4.0問責制

        質量檢查和質量控制主管

        5.0程序

        5.1微生物培養基的制備和使用方法

        5.1.1使用Hi-Media的脫水培養基。在使用媒體之前,請先檢查內部使用日期。
        5.1.2包裝上提供了準備介質的方法。它給出了每升注射用水要懸浮的粉末量。
        5.1.3稱量所需量的粉末,并添加所需量的新鮮收集的WFI。記下重量,充分混合以溶解,并在滅菌前檢查培養基的pH值。按照包裝上的說明消毒介質。高壓滅菌后;讓介質冷卻至55-60°C,在約55±5°C的溫度下存放或根據要求倒入板中。
        5.1.4此存儲的媒體可以使用7天。保持記錄媒體準備的使用和格式破壞。

        5.1.5肉湯培養基

        5.1.5.1稱重脫水培養基的量,并根據包裝上的說明添加WFI。記下每種介質的重量。
        5.1.5.2將固體溶解在WFI中,輕輕加熱(如有必要)以形成均勻的溶液,冷卻至室溫并通過使用0.1 M HCl或0.1M NaOH溶液調節所需的pH(在各個介質包裝上指定)。
        5.1.5.3在適當的燒瓶或試管中分配適量的培養基。用不吸水的棉布塞好,再用鋁箔紙包好。
        5.1.5.4按照包裝上的說明消毒培養基。高壓滅菌應在121°C,15磅/英寸²的條件下進行20分鐘或相應介質指定的時間。
        5.1.5.5滅菌后,將培養基冷卻至室溫,使用pH指示條或pH計再次檢查pH并進行分析。
        5.1.5.6將滅菌的肉湯培養基保存在25°C以下直至使用。

        5.1.6瓊脂培養基

        5.1.6.1按照培養基包裝上給出的方向稱量WFI中脫水培養基的量。記下每種介質的重量。
        5.1.6.2將固體溶解在WFI中,輕輕加熱(如果需要)以形成均勻的溶液,冷卻至室溫,使用0.1 M HCl或0.1 M NaOH溶液調節所需的pH(在相應的介質包裝上指定)。
        5.1.6.3在適當的燒瓶中分配適量的培養基。用不吸水的棉布塞好,再用鋁箔紙包好。
        5.1.6.4按照包裝上的說明消毒培養基。高壓滅菌應在121°C,15磅/英寸²的條件下進行20分鐘或相應介質指定的時間。
        5.1.6.5滅菌后,將介質冷卻至60ºC。
        5.1.6.6將熔融介質存放在保持在55-60ºC的烤箱中,直至進一步使用。
        5.1.6.7在某些情況下,例如亞硒酸鹽半胱氨酸肉湯,請勿對溶液進行高壓滅菌。制備溶液后,按照培養基包裝上給出的滅菌步驟進行。然后冷卻至室溫并使用。
        5.1.6.7對于瓊脂培養基,高壓滅菌后,將其冷卻至約45-50°C,然后將培養基無菌倒入無菌培養皿中,每盤15至20 ml。使這些板固化。關閉板,將其倒置并保存在BOD培養箱中(低于25°C)。
        5.1.6.8**中準備的所有介質應分配相應的批號。這些批號 應在媒體準備,實用程序和銷毀記錄中輸入。

        5.2分配批號

        在一個高壓滅菌循環中準備的所有介質應具有各自的批號,并且應將這些批號輸入到介質準備和記錄中。應按以下方式分配高壓滅菌介質的批號:
        XXX / ZZZZZ
        其中XXX:每年高壓滅菌器裝載號,從001開始。
        ZZZZZ:制造商提供的介質批號。
        在2小時內對微生物培養基進行滅菌。從他們的準備。

        5.3微生物培養基的儲存

        準備的培養基:
        肉湯:存放于25°C以下。
        熔融瓊脂培養基:在55-60°C之間儲存
        制備的板:在25°C以下在BOD中儲存

        5.4媒體測試:

        5.4.1 pH:在一次運行中,從各種營養培養基中制備一次,高壓滅菌后取樣,然后冷卻至室溫。用電極測量固體介質(固化前)和液體介質的pH值。記錄結果。如果測得的pH值不符合要求,則為同一批次的另外兩個容器確定pH值。如果兩次重復的結果均在限值范圍內,則可以將中等批次的樣品用于測試。如果結果不符合要求,則不得使用該批次并將其丟棄。

        5.4.2預孵育

        將培養基預孵育48小時。孵育后,對介質進行物理檢查以檢查是否存在任何污染(宏觀證據的增長),如果存在污染,請按照SOP丟棄所有介質以棄置介質。

        5.4.3促進生長的性質

        根據SOP,使用指示生物測試選擇性和非選擇性培養基的促生長特性。

        6.0縮寫

        SOP:標準操作程序
        QA:質量保證
        QC:質量控制
        BOD:生物需氧量
        M:摩爾比
        WFI:注射用水
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